传染性腹膜炎如何检测?

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一、检测项目

1.病原学检查 取病死鼠的肝、脾、肺、肠系膜淋巴结等器官,用生理盐水洗涤后,制成细胞混悬液;或取病死鼠的心、肝、脾、肺进行解剖,观察病变情况并摄片。取血涂片,瑞特染色镜检。

2.血清学检查 用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中CPV抗体,阳性表示曾经感染过该病毒,阴性则表示从未感染过该病毒。如果血清抗体由阴转阳,再复测一次,可确认感染。

3.PCR检测 对可疑病例进行肠道细菌培养的同时采集肝脏组织,提取总核酸,经RT-PCR扩增检测相关基因片段,明确是否有病毒复制。

二、检测方法

1.病原学检查 直接涂片瑞特染色检查有无病毒颗粒;用无菌针尖挑取胰腺组织制成匀浆,接种于含有15%马血清的MEM培养基中,置于37℃温箱中培养,每天观测形态变化和染色情况;如培养液出现混浊,应及时分离、浓缩、培养;

从第4天起,每天镜检培养物,注意检查是否有典型的CP病毒包涵体形成。还可用荧光抗体法检查细胞的内基质及线粒体是否有荧光蛋白的表达,以判定是否感染了该病毒。

2.血清学检查 ELISA检测血清中的抗CPV抗体,操作按说明书进行。

三、结果判读

1.病原学检查 可见多量白细胞和淋巴细胞,伴有轻度至中度核碎裂,可见典型的嗜酸性包涵体;若用荧光抗体法染色,可在细胞内基质和线粒体上发现绿色荧光。但须与细菌性疾病、寄生虫病等的细胞损害相区别。

2.血清学检查 采用间接法检测阳性率为80%左右。在发病早期,血中抗体浓度随病程而逐渐增高,病情恢复时,血液中抗体水平恢复到正常,且保持很长时间。故该检验方法有助于判断疾病的进程和预后。

四、注意事项

1.病原学检查 以细胞病变现象出现的时间作为判断指标。

2.血清学检查 采用双抗体夹心式ELISA,以排除不同型别病毒的交叉反应。同时,因为抗体产生需要一定的时间,所以应在感染后的4周测定血清抗体。

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